Essai n° 490 : Essai In Vitro de Mutation Génique Sur Cellules de Mammifères Utilisant
le Gène de la Thymidine Kinase
L'essai in vitro de mutation génique sur des cellules de mammifères peut être employé
pour détecter des mutations induites par les substances chimiques. Cette Ligne directrice
comprend deux essais de mutation génique, avec deux lignées cellulaires spécifiques
tk hétérozygotes : les cellules L5178Y tk+/-3.7.2C pour le test du lymphome de souris
(mouse lymphoma essai) (MLA), et les cellules TK6 tk+/- pour l’essai TK6. Les types
d’événements génétiques détectés en utilisant le locus tk comprennent soit les mutations
géniques que les changements chromosomiques.
Des cellules en suspension ou en culture monocouche sont exposées à quatre concentrations
analysables de la substance d'essai au moins, avec et sans activation métabolique,
pendant une période appropriée. Elles sont repiquées pour déterminer la cytotoxicité
et pour permettre l'expression phénotypique avant la sélection. La cytotoxicité est
habituellement déterminée en mesurant l'efficacité de clonage relative (survie) ou
la croissance totale relative des cultures après la période de traitement. Les cultures
traitées sont maintenues dans le milieu de croissance pendant une période suffisante,
caractéristique de chaque locus et de chaque type cellulaire, afin de permettre l'expression
phénotypique presque optimale des mutations induites. La fréquence de mutant est déterminée
par l’ensemencement d’un nombre connu de cellules dans le milieu contenant l'agent
sélectif pour détecter des cellules mutantes, et dans le milieu sans agent sélectif
pour déterminer l'efficacité de clonage (viabilité). Après un temps approprié d'incubation,
des colonies sont comptées.
Publié le July 29, 2016Également disponible en: Anglais
Dans la série:Lignes directrices de l'OCDE pour les essais de produits chimiques, Section 4: Effets
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