Essai n° 442B : Sensibilisation cutanée
Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: BrdU- ELISA
L’Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: BrdU-ELISA (ELGL: BrdU-ELISA)
est une variante non radioactive de la méthode ELGL qui vise à identifier les substances
chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent
dans les ganglions lymphatiques auriculaires. Cette méthode décrite chez la souris
se base sur la quantification de la 5-bromo-2- désoxyuridine (BrdU), un analogue of
thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre
animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations
de la substance d'essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul,
et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure 6 jours. Ensuite,
les animaux sont euthanasiés et une suspension unicellulaire de cellules de ganglions
lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape
cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez le animaux
du groupe contrôle négatif. Ensuite la BrdU dans l’ADN des lymphocytes est quantifiée
à l’aide d’un kit de dosage ELISA ou par cytométrie de flux (FCM). L’essai inclut
des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes. Les résultats
sont exprimés par l’Indice de Stimulation (IS) obtenu par calcul à partir des indices
moyens de marquage BrdU pour les différents groupes. Un SI ≥1.6 pour la méthode ELISA
ou un SI ≥2.7 pour la cytométrie de flux justifie l’évaluation de la substance d’essai
comme sensibilisant potentiel.
Publié le June 27, 2017Également disponible en: Anglais
Dans la série:Lignes directrices de l'OCDE pour les essais de produits chimiques, Section 4: Effets
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